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    蛋白纯化服务

        常用分离纯化手段包括:膜分离技术、沉淀分离技术、电泳分离技术、层析分离技术。其中膜分离技术与沉淀分离技术属于蛋白粗提取,电泳分离技术主要应用于检测分析。蛋白纯化目前主要选择层析分离技术,通常分为以下几种方法

    纯化方法

    原理

    适用范围

    凝胶过滤层

    根据分子间的大小或者形状差异进行分离

    根据生物活性物质与特异性配体间的特异性亲和力来达到分离目的

    离子交换层析

    根据蛋白质分子表面静电荷的差异进行分离

    阳离子交换主要是改变pH,主要应用于等电点大于5的蛋白质;阴离子交换主要是改变盐浓度,适用于大部分蛋白质,除杂能力较强,对热源质、核酸、外毒素及电荷性有差别的蛋白效果显著。

    疏水层

    根据蛋白质与疏水吸附剂之间的疏水作用差异进行分离

    适用范围广,原则上可用于所有蛋白质的纯化,适合于从大体积中提取低含量的目标蛋白,对DNA及小牛血清去除率较高

     

    亲和层析

    根据生物活性物质与特异性配体间的特异性亲和力来达到分离目的

    适用于抗原抗体亲和纯化,以及一系列标签纯化

     

    亲和纯化常用标签 



     常用类型有:HIS标签(镍柱纯化)、GST标签(谷胱甘肽)、Flag标签、MBP标签、Strep tag标签


    比较项目

    大小

    纯化原理

    特点

    HIS Tag

    一般为6-8个组氨酸组合

    组氨酸残基上的咪唑基团可与层析介质中的金属离子螯合,再通过提高缓冲液中咪唑浓度进行竞争性洗脱达到纯化效果

    标签小,纯化简单;

    能与其他标签形成双标签;

    能纯化可溶性/包涵体蛋白

    GST Tag

    26KD

    利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱原理来进行纯化

    可溶性标签,提高蛋白表达的可溶性;

    不能应用于包涵体等需变形处理的纯化

    Flag Tag

    8个氨基酸

    DYKDDDDK

    琼脂糖上偶联有flag抗体,可采用竞争性洗脱或酸性洗脱

    在真核表达系统中表达效率更高;

    可以纯化有活性的融合蛋白,

     

    MBP Tag

    42.5 KD

     多糖树脂吸附

     

    可以减少目标蛋白的降解,增加蛋白的表达量和稳定性,提高表达产物的水溶性,但标签较大,

    对蛋白的结构和功能会有一定影响。

    适用于包涵体的纯化

    Strep Tag

    8个氨基酸

    WSHPQFEK

    生物素(biotin)和抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)之间的结合反应。

    纯化流程温和能保持目标蛋白活性;

    能进行变性条件下的纯化;

    价格相对HIS Tag而言较高

     

     

    服务类型


    定制的蛋白纯化服务包括:

    /无标签重组蛋白分离纯化,天然蛋白纯化分离

    天然蛋白纯化服务

     

    项目名称

    纯化方案                                

    天然大分子蛋白分离纯化

    选用适当孔径的分子筛分离纯化,配合使用阴、阳离子吸附柱以及HLPC,鉴定并收取相应洗脱峰。

    天然小分子蛋白分离纯化

    多层级分离过滤配合分子筛去除大分子杂质,结合使用大孔树脂或反向树脂纯化小分子蛋白,经 HPLCMS鉴定纯化。

    混合未知蛋白样品分离纯化

    由卡梅德生物制定相应方案进行分离纯化,并经质谱鉴定、活性鉴定等多种方案确认分离产物。                       

     

    重组蛋白纯化服务


    项目名称

    纯化方案

    重组蛋白脱标签及分离纯化

    商品化亲和纯化树脂,如Ni柱,GST-Beads等分离纯化带有6xHisGSTSUMOMBP融合蛋白,获得纯度90%以上融合蛋白

    不含标签的重组蛋白纯化

    抗体亲和纯化;也可选择类似于天然蛋白纯化方式,依项目而定

    包涵体变性与复性纯化

    根据蛋白质不同的性质,可以选择尿素、盐酸胍、去垢剂、极端pH等,以保证最大程度获得单体状态的变性蛋白


     

    项目流程



    步骤

    服务内容

    周期

    Step1:蛋白检测前与预实验

    SDS-PAGE检测蛋白情况;

    小体积纯化与检测

    1-2

     

    Step2:蛋白纯化与检测

    大量纯化;

    SDS-PAGE

    WB检测(视项目而定);

    浓度检测

    1-2

    交付

    纯化报告,图片数据;

    成品蛋白

     

    服务优势


    设备一流,纯化方式多元化,适合不同来源的重组蛋白或天然蛋白;

    专业技术团队为您量身定制最佳纯化方案;

    提供全面的蛋白纯化分析报告;


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