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    Sanger测序

    服务介绍  Service Introduction



            艾基生物有近十年的 Sanger 测序经验,针对样品的复杂程度摸索出一系列的解决方案,并且在 Sanger 测序平台的基础上将应用扩展至分子生物学上游的多个领域,包括:SNP 检测,片段分析, SSR/STR 分型, 基因检测, 菌种鉴定, 线粒体测序, 基因组测序,跑板等服务。

     

     

    平台优势  Service Advantages



            质量稳定:精确读长达 800 bp 以上,有效读长度超过 900 bp。

            准确度高QV20+ 和 CRL 值 >1000。

            时效性强:日均处理量 >2000 个反应,结果及时、准确,最快 24 小时出结果。

            困难模板:成熟的方案应对 High GC,AT rich,发夹结构,重复序列。

            一站式服务:基因组提取、引物设计、PCR 扩增、Primer Walking、测序及结果分析。

     

    技术流程 Technical Procedures




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    样品要求 Sample Requirenments



          【菌液和平板】

            需过夜培养的菌液,至少提供 200 ul;无需培养可直接提取的样品,请提供 2-4 ml 过夜培养的菌液;

            样品请注明抗性,常备抗生素:氨苄青霉素 (Amp)、卡那霉素 (Kan)、氯霉素 (Chl);

            若菌液所含质粒为超低拷贝,请直接提供质粒;

            除大肠杆菌以外的菌液,请直接提供质粒。

            【质粒】

            浓度 >50 ng/ul,总体积不少于 10 ul;

            请确保质粒溶解于灭菌的双蒸水中,TE 溶解的质粒会造成反应失败。

            【PCR 产物】

            已纯化 PCR 产物:请确保 DNA 溶解于灭菌的双蒸水中,浓度 >30 ng/ul,总体积不少于 20 ul。

            未纯化 PCR 产物:请注明片段长度,条带是否单一,原液总体积不少于 20 ul;

            片段 < 100 bp 建议克隆后测序,片段 > 4 kb 建议分段扩增后测序。

            【测序引物】

            浓度 ≥ 5 pmol/ul,总体积不少于 10 ul,并确保溶解于灭菌的双蒸水中;

            测序引物长度尽量控制在 20-30 bp,引物过短或过长均会影响测序质量;

            含兼并碱基荧光标记或修饰的引物不适用于测序。


    注意事项  Notes


    样品登记表需按要求填写详细,避免问题订单带来的实验延误;

    确保样品与登记表名称一致,可包含“字母”“数字”“—”;请避免出现 汉字、拉丁字母及其他特殊字符;

    填写“测通”的样品会默认拼接,“双向”测序的样品如需拼接请注明;

    如样品为菌液或平板,请注明抗生素类型;

    若测序引物不是通用引物,请自备或委托合成,选择引物类型(通用 / 新送 / 已送 / 需合成)并注明浓度;

    若送测质粒不是常用载体,通用引物请写明引物全称;

    未纯化 PCR 产物若已检测为单一条带,请在订单中注明,可大大提高测序成功率;

    存在特殊结构的,如:High GC、AT rich、重复序列、发夹结构请在订单上备注;

    大量样品送测时,请使用电子订单,方便核对且不易出错。

     


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