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    AAV包装

    服务介绍  Service Introduction



            腺相关病毒 (Adeno-associated Virus,AAV) 属于细小病毒科(parvoviridae)单链 DNA 病毒。病毒基因组约 4700bp,包括 2 个 145nt 的反向末端重复序列 (ITR) 以及位于两者之间的上下游两个开放读码框架 (ORF),分别编码 rep 和 cap。cap 基因编码病毒衣壳 蛋白, rep 基因参与病毒的复制和整合。AAV 能感染多种细胞。rep 基因产物存在时,病毒 DNA 很容易整合到人类第 19 号染色体。

           AAV 是一种复制缺陷型微小病毒,通常需要在辅助病毒(如腺病毒、单纯疱疹病毒等)的辅助下才能发生毒性感染,生成子代 AAV。艾基生物采用 AAV 无辅助病毒系统 (AAV Helper-Free System),在无辅助病毒的条件下生产重组腺相关病毒。在这个系统中, rep 和 cap 基因从病毒载体中被转移到辅助质粒 pAAV-RC 中,而 AAV ITRs 仍位于病毒载体中。生产 AAV 病毒颗粒所需的腺病毒基因 产物(包括 E2A,E4 等基因)大部分则由 pHelper 质粒提供,其余的腺病毒基因产物由稳定表达腺病毒 E1 基因的宿主细胞提供。在辅 助质粒的帮助下,仅需两端的 ITR 就能将携带的外源片段包装进入腺相关病毒颗粒,因此,rep 和 cap 基因的转移后空出的位置可以允许 外源基因插入病毒基因组中。(AAV基因组如下图)

    图片11 

     

    服务优势 Service Advantages


     

       安全性高:重组腺相关病毒载体 (rAAV) 源于非致病的野生型腺相关病毒。迄今为止尚未发现对人体致病的野生型 AAV,重组 AAV 在基 因组序列上去除了大部分的野生型AAV 基因组元件,进一步保证了安全性。

       免疫原性低:进行动物实验时造成的免疫反应小。

       宿主范围广:能感染分裂细胞和非分裂细胞

       表达稳定:能介导外源基因体内长时间稳定表达。

       物理性质稳定:可抗氯仿,在 60℃不能被灭活。

     

     

    提供的服务 Services


     

          AAV 载体构建;

          干扰腺相关病毒(shRNA 和 miRNA)包装;

          过表达腺相关病毒的包装。


     

    提供产品



    产品名称


    病毒滴度(vg/ml)

    规格

    对照组

    周期

    过表达腺相关病毒

    过表达腺相关病毒(<1.5k)

    1010-1012 

    1mL

    200uL(1010-1012 vg/ml )

    4-5周

    过表达腺相关病毒(>1.5k)

    1010-1012 

    1mL

    200uL(1010-1012 vg/ml )

    4-5周

    干扰腺相关病毒


    1010-1012 

    1mL

    200uL(1010-1012 vg/ml )

    4-5周

     

     

     

    技术流程  Technical Procedures



     图片12

     

     

    Tips


    AAV 病毒载体不同血清型】

           研究发现 AAV 具有多种血清型,各种不同血清型的 AAV 载体的主要区别是衣壳蛋白不同。AAV 进入细胞前,首先要通过衣壳蛋白 与细胞表面的相应受体结合进而附着于细胞表面,随后再通过与其它复合受体的相互作用来启始病毒颗粒的细胞内转运等生物学活动。因 此 AAV 不同血清型对不同的组织和细胞亲和性不同,体现出 AAV 血清型对不同组织器官的转染效率存在差异。目前 AAV 可分为 12 种血 清型 AAV1-AAV12。艾基生物可针对不同的组织器官类型选择相应血清型的 AAV 病毒进行包装。

     

    不同血清型对各组织器官的亲和性

    组织

    最适血清型

    中枢组织

    AAV1,AAV2,AAV4,AAV5,AAV8,AAV9

    心脏

    AAV1,AAV8,AAV9

    肾脏

    AAV2

    肝脏

    AAV7,AAV8,AAV9

    AAV4,AAV5,AAV6,AAV9

    胰脏

    AAV8

    骨骼肌

    AAV1,AAV6,AAV7,AAV8,AAV9

    感光受体细胞

    AAV2,AAV5,AAV8

    视网膜色素细胞

    AAV1,AAV2,AAV4,AAV5,AAV8

     


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