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    技术支持

    致力于引进国外先进技术,为广大科研工作者和医疗机构提供高质量 的科研技术支持 。

    样品制备指南

    高通量测序样品

    样品制备指南


    动植物基因组de novo 测序

     

    样品总量:小片段文库样本制备需要总量大于1 μg 的样品,mate-pair 文库(2 kb、5 kb、10 kb、)样品,制备需要总量20-50 μg ,

    为保证实验质量及延续性,请一次性提供至少2 次样本制备总量;

    样品浓度纯度:样品浓度>200 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无蛋白质、RNA 或者肉眼可见杂质污染;

    样品质量:基因组完整、无降解,电泳结果基因组DNA 主带应在入-Hind llldigest 最大条带23 KB 以上且主带清晰,无弥散;

    样品保存:请保存于干粉、酒精、TE buffer 或超纯水中,并请在样品信息单中注明。

     

    动植物基因组重测序

     

    DNA 样品总量:每次建库需要准备样品1 μg,建议单次送样提供2 次制备总量;

    样品浓度和纯度:样品浓度>50 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见杂质污染,基因组完整、无降解,电泳中DNA 主带

    应大于23 kb;

    样品选择:对于植物样品建议选取黑暗培养的黄化苗或嫩苗,动物样品应选择肌肉、血等脂肪含量较少的组织进行取样;

    样品保存:请选择干粉、酒精、TE 或超纯水的保存方式。

     

    全外显子组及目标区域重测序

     

    DNA 样品总量:请一次性提供至少1 μg 高质量的基因组DNA;

    样品浓度和纯度:样品浓度>50 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见污染;

    样品质量:基因组完整、无降解,电泳中DNA 主带应大于23 kb;

    样品选择:对于植物样品建议选取黑暗培养的黄化苗或嫩苗,动物样品应选择肌肉、血等脂肪含量较少的组织进行取样;

    样品保存:请选择干粉、酒精、TE 或超纯水中进行保存。

     

    微生物基因组de novo 测序

     

    DNA 样品总量:小片段文库样品制备需要总量3 μg 的样品,mate-pair 文库(2 kb、5 kb、10 kb)样品制备需要10-50 μg 的样

    品, 为保证实验质量及延续性,请一次性提供至少2 次样品制备量;

    样品浓度和纯度:样品浓度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见污染;

    样品质量:基因组完整、无降解;

    样品选择:对于细菌和真菌样品,希望尽量来自于同一个菌株,不要有宿主DNA 污染;

    样品保存:请选择干粉、酒精、TE 或超纯水的保存方式之一。

     

    转录组测序


    转录组样品:RNA 样品总量: ≥ 1.0 μg,RNA 样品浓度: ≥ 50 ng/μl;

    样品浓度和纯度:样品浓度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见污染;

    样品质量:使用Agilent Bioanalyzer 仪器检测,则获得的总的RNA 28S:18S >1,RIN 动物>7,RIN 植物 >6.5;

    样品选择:对于细菌和真菌样品,希望尽量来自于同一个菌株,不要有宿主DNA 污染;

    样品保存:请选择乙醇、DEPC 水保存样品,并在样品信息单中注明;

    样品运输:样品请置于1.5 ml 管中,并使用封口膜封好后干冰运输, 请勿反复冻融。


    小RNA 测序


    RNA 样品总量:一次性提供至少3 μg 高质量的总RNA;

    样品浓度和纯度:样品浓度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见污染;

    样品质量:使用Agilent Bioanalyzer 仪器检测,则获得的总的RNA 28S:18S >1,RNA>7.5;

    样品保存:请选择乙醇、DEPC 水保存样品,并在样品信息单中注明;

    样品运输:样品请置于1.5 ml 管中,并使用封口膜封好,放置足够的干冰运输。

     

    lncRNA 测序

     

    转录组样品:RNA 样品总量 ≥ 2.0 μg,RNA 样品浓度 ≥ 100 ng/μl;

    样品浓度和纯度:样品浓度>100 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见污染;

    样品质量:使用Agilent Bioanalyzer 仪器检测,则获得的总的RNA 28S:18S>1,RIN 值 >7.5;

    样品选择:对于细菌和真菌样品,希望尽量来自于同一个菌株,不要有宿主DNA 污染;

    样品保存:请选择乙醇、DEPC 水保存样品,并在样品信息单中注明;

    样品运输:样品请置于1.5 ml 管中,并使用封口膜封好后干冰运输,请勿反复冻融。

     

    表观遗传学相关DNA 测序

     

    DNA 样品总量:全基因甲基化测序需提供3 μg 的基因组DNA,RRBS 需提供至少4 μg 的DNA,ChIP-seq 和MeIDP-seq 需提供

    至少30 ng 的抗体富集后的DNA 片段样品(片段长度200-500 bp),为保证质量和延续性,请一次性提供至少2 次样本制备量;

    样品浓度和纯度:基因组DNA 样品浓度>100 ng/μl,富集后DNA 样品浓度>5 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无肉眼可见污染;

    样品保存:请选择乙醇、纯水进行保存,并在样品信息单中注明;

    样品运输:请将样品置于1.5 ml 管中,并用封口膜封好。

     

    宏基因组测序

     

    样品总量:环境细菌多样性分类一次文库制备所需要的样品量为1 μg DNA,宏基因组测序一次文库制备所需要的样品量为3 μg DNA,

    为保证实验的质量及延续性,请一次性提供至少两次的制备量(注:不同环境DNA 质量差别较大,具体样品量请咨询当地技术人员);

    样品浓度和纯度:环境样品浓度>50 ng/μl,宏基因组为30 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无蛋白质、RNA 或肉眼可见杂质污染;

    样品质量:基因组完整、无降解,电泳结果基因组DNA 主带在预期位置,清晰,无弥散,cDNA 片段化样品,片段大小符合预期位置;

    样品保存:请选择干粉、酒精、TE buffer 或超纯水一种,并在样品信息单中注明;

    样品运输:请将样品置于1.5 ml 管中,做好标记,并用封口膜好,并同《测序样品订单》一起放在塑料样品袋封口,基因组DNA 如果

    用乙醇沉淀,可以常温运输。

     

    双酶切RAD 测序

     

    客户提供:目的物种的基因组信息或近源参考基因组的信息,限制性内切酶的种类信息;

    样品总量:每个样品制备需要大于3 μg 的样品,为保证实验质量及延续性,请一次性提供至少4 μg 的样品;

    样品浓度和纯度:样品浓度>50 ng/μl,OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无蛋白质、RNA 或肉眼可见杂质污染;

    样品质量:基因组完整、无降解,电泳结果基因组DNA 主带应在-Hind III digest 最大条带23 kb 以上且主带清晰,无弥散;

    样品保存:请选择干粉、酒精、TE buffer 或超纯水一种,并在样品信息单中注明。

     

    细胞器基因组de novo 测序

     

    样品总量:使用密度梯度离心分离后的样品一次制备DNA 文库的量至少为0.5 μg DNA,PCR 富集方法样品一次制备需要至少

    200 ng DNA,建议客户提供两次计品的总量;

    样品浓度和纯度:OD260/280 介于1.8-2.0 之间,无蛋白质、RNA 或肉眼可见杂质污染;

    样品质量:基因组完整、无降解,电泳结果基因组DNA 主带清晰,无弥散;

    样品保存:请选择干粉、酒精、TE buffer 或超纯水一种,并在样品信息单中注明。

     

    扩增子测序

     

    常见环境样本(请使用干冰或冰袋运送):土壤、淤泥、沉积物 ≥ 3 g,粪便 ≥ 500 mg,组织样本 ≥ 1g;

    水体送样为过滤后的滤膜( 最适滤膜直径3-4 cm,孔径大小一般选择0.22 μm 或者0.45 μm);

    拭子样本 ≥ 2 个;

    DNA/PCR 产物(请使用干冰或冰袋运送);

    DNA:浓度 ≥ 5 ng/μl,总量 ≥ 150 ng,DNA 要有明显主带,无降解,无RNA、蛋白质等杂质污染;

    PCR 产物:浓度 ≥ 20 ng/μl,总量 ≥ 400 ng,片段大小< 450 bp,条带单一,无降解,无引物二聚体。




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